一、樣品提取

1）稱取豬肉 2.0g 于 50mL 離心管中，加入濃度為 100ppm 氟 尼辛 -D3 內(nèi)標(biāo)物 40μL，再加 2.0mL 0.1M Na2EDTA 溶液，渦 旋混勻 1min，冰浴超聲提取 10min，于 4℃ 9000r/min 下離 心 5min，移上清液于另一 15mL 離心管中； 

2） 再 加 入 7.0mL 2% 甲 酸 乙 腈 于 50mL 離 心 管 中， 渦 旋 5min，于 4℃ 9000r/min 下離心 5min，合并兩次上清液，用 2% 甲酸乙腈定容至 10mL； 3） 將 合 并 定 容 后 的 上 清 液， 于 4 ℃ 9000r/min 下 離 心 5min，待凈化。 

二、 樣品凈化（Lipoclean 磷脂去除柱，300mg/3mL） 

上樣：取 2.5mL 待凈化液過(guò)柱，重力作用下洗脫，收集流 出液； 

洗脫：再加 625μL 80% 乙腈水進(jìn)行二次洗脫，收集流出液， 施加真空排空液體，合并兩次流出液； 將 0.5mL樣品洗脫液和 0.3mL H2O加入到樣品瓶中，渦旋混勻， 過(guò) 0.22μm 有機(jī)濾膜供上機(jī)測(cè)試。 

三、標(biāo)曲配制 

采用空白基質(zhì)配制標(biāo)曲，內(nèi)標(biāo)法定量，標(biāo)曲濃度范圍 0.5~100  ppb。 

四、儀器條件 

色譜條件： 儀器：UPLC/MS/MS (Thermo Fisher TQS Endura ) 色譜柱：CommaSil? ODS (2.1mm×50mm, 1.8μm) 流動(dòng)相：A：水 ( 含 0.1% 甲酸） B：甲醇（含 0.1% 甲酸） 洗脫方式：梯度洗脫，見(jiàn)表 1

表 1 梯度洗脫程序

六 注意事項(xiàng) 

1. 為防止沙星類化合物的損失，故先使用 0.1M Na2EDTA 緩沖液進(jìn) 行水溶液萃取。 

2. 為改善與固體殘留物的相分離，進(jìn)一步降低溫度對(duì)部分目標(biāo)物 的影響，建議使用低溫離心 (4℃ )。 

3. 為進(jìn)一步確保蛋白及部分固體殘留物的有效去除，建議使用高 速離心 (9000r/min)。 

4. 建議加入內(nèi)標(biāo)物，采用空白基質(zhì)配制標(biāo)曲，有利于校正目標(biāo)分 析物的回收率。