一、樣品提取 

稱取混勻牛奶試樣5.00 g(精確到0.01 g)，置于50 mL離心管中， 用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 緩沖液溶解并定容至 50 mL，渦 旋混合 1 min，冰水浴超聲 10 min，轉(zhuǎn)移至 50 mL 離心管中， 冷卻至 0℃ -4℃，5000 r/min 離心 10 min( 溫度低于 15℃ )， 用快速濾紙過濾待凈化。

二、SPE 柱凈化（Copure? HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上樣和洗脫：準(zhǔn)確吸取 10 mL 備用液過 HLB 固相萃取柱， 待樣液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 / 水溶液 （1:9, v/v）淋洗，棄去全部流出液。2.0 kPa 以下減壓抽 干 5 min，Z后用 10 mL 甲醇 / 乙酸乙酯溶液 (5:95, v/v) 洗脫，收集洗脫液。 

重新溶解：洗脫液于 40℃氮?dú)獯蹈桑?1.0 mL，10 mmol/ L 三氟乙酸水溶液溶解殘余物，水系濾膜過濾，供高效液相 色譜測定。

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測器：Waters 2487 紫外檢測器 檢測波長：350 nm 流動相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脫方式：梯度洗脫，見表 1 

表 1 流動相梯度洗脫程序

柱溫：室溫 流速：1.0 mL/min 進(jìn)樣體積：20 μL 

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

表 2 0.8 mg/kg 牛奶基質(zhì)中四環(huán)素的添加回收結(jié)果