1、提取

10 mL 樣品與20 mL 乙腈混合，10000rpm 下均質(zhì)1 min，4000 rpm 下離心5 min，收集上清液。取15 mL 提取液（相當(dāng)于5 mL 樣品），35℃?下減壓蒸餾除去乙腈，向剩余的水相加入20 mL 磷酸鹽緩沖液*，并用0.1 mol/L NaOH 溶液調(diào)節(jié)pH 8.5，混勻，待凈化。

注：0.05 mol/L 磷酸氫二鉀溶液，pH 8.5

2、凈化

a 活化： 將6 mL 甲醇、6 mL 水依次加入ProElut PLS 500 mg/6 mL (Cat.#68005)，流出液棄去；

b 上樣： 將待凈化的樣品液加入柱中*，流出液棄去；

c 淋洗： 依次用3 mL 磷酸鹽緩沖液*、3 mL 水淋洗，淋洗液棄去，并將PLS 柱抽干；

d 洗脫： 用6 mL 乙腈洗脫，收集洗脫液；

e 重新溶解：35 oC 下將洗脫液用氮?dú)獯蹈?，然后?.05 mol/L 磷酸鹽緩沖溶液（pH 7.0）定容至1 mL，微孔濾膜過濾后，LC-MS/MS 分析

注：樣品體積大于柱容積，需分次上樣或在PLS 柱上安裝60 mL 儲(chǔ)液管 (Cat.#4812)，適配器 (Cat.#4803) ；0.05 mol/L 磷酸氫二鉀溶液，pH 8.5。

流動(dòng)相：緩沖溶液+ 乙腈，梯度

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：20 μL

柱溫：30 ℃

檢測器：串聯(lián)質(zhì)譜，ESI+，MRM 模式檢測

適用于牛奶中羥氨芐青霉素、鄰氯青霉素、雙氯青霉素等青霉素類藥物的檢測。

1. 羥基芐青霉素；2. 氨芐青霉素；3. 甲氧苯青霉素；4. 芐青霉素；5. 苯氧甲基青霉素；6. 苯唑青霉素；7. 苯氧乙基青霉素；8. 鄰氯青霉素；9. 乙氧萘青霉素；10. 雙氯青霉素