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1、提取
(1)將20mL牛奶和20mL Mcllvaine緩沖液加入50mL塑料離心管中;
(2)將樣品渦旋混合2 min,4000 rpm以上離心10 min;
(3)取20mL上清液,待凈化。
注:Mcllvaine 緩沖液(pH 4) / 稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O)27.6g、檸檬酸(C6H8O7?H2O) 12.9 g、乙二胺四乙酸二鈉鹽37.2 g,用水溶解后稀釋并定容至1000 mL。
2、凈化
ProElut PLS 150mg/6mL(Cat.#68004)
(1)活 化:依次加入5mL甲醇,5mL水,流出液棄去。
(2)上 樣:將20mL提取液加入柱中,流出液棄去。
(3)淋 洗:依次用5mL水,5mL5%的甲醇水溶液淋洗,流出液棄去,然后將PLS柱抽干。
(4)洗 脫:5mL甲醇洗脫,流出液收集。
(5)重新溶解:*將洗脫液在40℃減壓濃縮至近干,然后用流動(dòng)相重新定容至1mL。
注:由于上清液的量大于柱管體積,應(yīng)分次上樣,或在PLS 柱上加20 mL 儲(chǔ)液管(Cat.#4811),適配器(Cat.#4803)
流 速: 1.0 mL/min
檢測器: UV 365 nm
柱 溫: 30 ℃
進(jìn)樣量: 20 μL
流動(dòng)相A: 0.01mol/L草酸水溶液 流動(dòng)相B: 乙腈:甲醇1:1 梯度程序 時(shí)間0-10.01min 流動(dòng)相B從30%到50%;10.01~10.5min 流動(dòng)相B從50%到30%;10.5~20min流動(dòng)相B為30%。
適用于牛奶中四環(huán)素類藥物的測定。
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